RESUMEN

Con el objetivo de caracterizar y determinar la frecuencia de genes que codifican metalo-β-lactamasas (MBL) en aislados clínicos de Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa), se realizó un estudio transversal en el Hospital Militar Central (HMC) de Lima, Perú, entre enero y setiembre del 2016. Se analizaron 76 aislados de P. aeruginosa con sensibilidad disminuida a carbapenémicos y resistentes a ceftazidima. La detección fenotípica de MBL se realizó por el método de sinergia de doble disco entre imipenem y meropenem frente al ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), y la identificación de los genes por reacción en cadena de la polimerasa. De los 76 aislados, 24 (31,6 %) fueron positivos para MBL por el método fenotípico, confirmándose genéticamente todos. Se encontró el gen bla _IMP en 23/24 (95,8 %) y bla _VIM en 1/24 (4,2 %). Ningún aislado presentó bla _NDM. El gen bla _IMP resultó ser el más frecuente entre los aislados clínicos de P. aeruginosa no sensibles a carbapenémicos en el HMC.

Palabras clave
Pseudomonas aeruginosa; Carbapenémicos; Beta-Lactamasas; Resistencia betalactámica; Perú

ABSTRACT

hat codify metallo-β-lactamases (MBL) in clinical isolates of Pseudomona aeruginosa (P. aeruginosa), a cross-sectional study was conducted in the Central Military Hospital (HMC) of Lima, Peru, between January and September, 2016. Seventy-six (76) isolates of P. aeruginosa with diminished sensitivity to carbapenemes and resistant to ceftazidime were analyzed. The phenotype detection of MBL was made by double disc synergy between imipenem and meropenem versus ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), and the identification of the genes was performed by polymerase chain reaction. Of the 76 isolates, 24 (31.6%) were positive for MBL by the phenotype method, genetically confirming all. The bla_IMP gene was found in 23/24 (95.8%) and bla_VIM in 1/24 (4.2%). No isolate had bla_NDM. The bla_IMP gene turned out to be the most frequent among clinical isolates of P. aeruginosa not sensitive to carbapenemics at this Hospital.

Keywords
Pseudomonas aeruginosa; Carbapenems; Beta-Lactamases; Beta-Lactam resistance, Peru

INTRODUCCIÓN

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) es un patógeno oportunista de gran importancia clínica en el ambiente hospitalario. Fue el agente infeccioso más frecuente (16 %) hallado en un hospital nivel IV en Lima ¹1. Hidalgo LF, Marroquín JE, Antigoni J, Samalvide F. Prevalencia de infec- ciones hospitalarias en un hospital pe- ruano de nivel IV, en el año 2008. Rev Med Hered. 2011; 22(2):76-81. doi: 10.20453/rmh.v22i2.1106.
https://doi.org/10.20453/rmh.v22i2.1106... . Asimismo, es el primer causante de neumonía asociada a la ventilación mecánica en las unidades de cuidados intensivos (UCI) causando elevadas tasas de mortalidad ²2. Nicolau CJ, Oliver A. Carbapenema- sas en especies del género Pseudomonas. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010; 28(Supl 1):19-28.^,33. Vilar-Compte D, Jacquemin B, Díaz- González A, Velásquez C, Volkow P. Brote por Pseudomonas aeruginosa, en el área de atención ambulatoria de heridas quirúrgicas, en pacientes pos- mastectomizadas. Salud pública Méx. 2003; 45(5):371-78.. Su capacidad de adaptación, diseminación, resistencia intrínseca a los antimicrobianos y su capacidad para adquirir nuevos mecanismos de resistencia hacen difícil el tratamiento de las infecciones causadas por esta bacteria ²2. Nicolau CJ, Oliver A. Carbapenema- sas en especies del género Pseudomonas. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010; 28(Supl 1):19-28.^,33. Vilar-Compte D, Jacquemin B, Díaz- González A, Velásquez C, Volkow P. Brote por Pseudomonas aeruginosa, en el área de atención ambulatoria de heridas quirúrgicas, en pacientes pos- mastectomizadas. Salud pública Méx. 2003; 45(5):371-78..

La resistencia intrínseca a los antimicrobianos en P. aeruginosa, se debe principalmente a la presencia de una membrana externa poco permeable, a una enzima β-lactamasa tipo Amp C inducible y a un sistema de bombas de expulsión activa de antimicrobianos ⁴4. Estepa V. Caracterización de mecanis- mos de resistencia a carbapenémicos, integrones y tipificación molecular en cepas de Pseudomonas aeruginosa de diferentes orígenes. ENT#091;Tesis Doctor- alENT#093;. Logroña: Universidad de la Rioja; 2014.. Además, este microorganismo tiene una elevada capacidad para adquirir resistencia a los antibióticos denominados antipseudomónicos, incluyendo carbapenémicos, que son antibióticos betalactámicos de amplio espectro y que frecuentemente se usan en el tratamiento de infecciones causadas por P. aeruginosa multirresistentes (MDR).

Actualmente se reporta un incremento de cepas de P. aeruginosa resistentes a carbapenémicos, siendo los principales mecanismos: mutaciones o pérdida de porina OprD, sobreexpresión de bombas de eflujo, la hiperproducción de betalactamasa cromosómica AmpC y la producción de enzimas carbapenemasas ⁴4. Estepa V. Caracterización de mecanis- mos de resistencia a carbapenémicos, integrones y tipificación molecular en cepas de Pseudomonas aeruginosa de diferentes orígenes. ENT#091;Tesis Doctor- alENT#093;. Logroña: Universidad de la Rioja; 2014.^,66. Cejas D, Almuzara M, Santella G, Tu- duri A, Palombarani S, Figueroa S, et al. Caracterización fenotípica y genotípica de la resistencia a imipenem en Pseudo- monas aeruginosa aisladas en un hospi- tal de Buenos Aires. Rev argent micro- biol. 2008; 40(4):238-45.. En P. aeruginosa se han descrito carbapenemasas de clase A, B (metalo-β-lactamasas) y D (oxacilinasas), siendo las metalo-β-lactamasas (MBL) las de mayor prevalencia a nivel mundial. Una de las características de las MBL es que no hidrolizan el aztreonam, por lo cual, no hacen resistencia a este antibiótico, pudiendo ser indicativo de la presencia de estas enzimas ⁵5. Gutkind GO, Di Conza J, Power P, Radice M. ß-lactamase-mediated resistance: a biochemical, epidemiological and genetic overview. Curr Pharm Des. 2013; 19(2):164-208.^,66. Cejas D, Almuzara M, Santella G, Tu- duri A, Palombarani S, Figueroa S, et al. Caracterización fenotípica y genotípica de la resistencia a imipenem en Pseudo- monas aeruginosa aisladas en un hospi- tal de Buenos Aires. Rev argent micro- biol. 2008; 40(4):238-45..

Se han descrito varios grupos de MBL y las variantes tipo imipenemasas (IMP), Verona Integron-encoded Metallo-β- lactamase (VIM) y New Delhi Metallo-β-lactamase (NDM) son las de mayor frecuencia e importancia clínica ⁷7. Radice M, Marin M, Giovanakis M, Vay C, Almuzara M, Limansky A. et al. Criterios de ensayo, interpretación e informe de las pruebas de sensibilidad a los antibióticos en los bacilos gram negativos no fermentadores de impor- tancia clínica: recomendaciones de la subcomisión de antimicrobianos de la SADEBAC- AAM. Rev argent micro- biol.2011; 43:136-56.^,88. Togneri A, Gómez A, Podestá L, Pérez M, Faccone D, Ríos L, et al. Diseminación de blaIMP-8 en entero- bacterias aisladas en un hospital de Buenos Aires. Rev Argent Microbiol. 2013; 45(2):104-09.. Las MBL son transferibles en genes cassettes de integrones y en plásmidos o transposones, además de estar asociados a otros genes de resistencia ubicados en los mismos elementos genéticos móviles, lo cual confiere a las cepas portadoras, resistencia a múltiples antibióticos ²2. Nicolau CJ, Oliver A. Carbapenema- sas en especies del género Pseudomonas. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010; 28(Supl 1):19-28.. De allí que las MBL de transmisión plasmídica tienen gran importancia, debido a su difusión mundial entre Pseudomonas spp., Acinetobacter spp., Klebsiella spp. y E. coli²2. Nicolau CJ, Oliver A. Carbapenema- sas en especies del género Pseudomonas. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010; 28(Supl 1):19-28..

En el Hospital Militar Central (HMC) no se han realizado estudios de resistencia a los carbapenémicos en P. aeruginosa. La producción de MBL es uno de los mecanismos más importantes de resistencia a estas drogas, siendo su caracterización y detección temprana fundamental para mejorar las medidas de control orientadas a evitar posibles brotes de bacterias multirresistentes.

MENSAJES CLAVE

Motivación para realizar el estudio . Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) es una bacteria oportunista de importancia en pacientes hospitalizados. Su aislamiento con resistencia a carbapenémicos es cada vez mayor. Presentamos el primer reporte de carbapenemasas tipo metalo-β-lactamasas (MBL) en el Hospital Militar Central de Perú.

Principales hallazgos. De los aislamientos clínicos de P. aeruginosa con sensibilidad disminuida a carbapenémicos, el 31,6 % son productores de MBL y portan principalmente el gen blaIMP.

Implicancias. El gen blaIMP es de fácil transferencia entre bacilos gram negativos, pudiendo causar brotes intrahospitalarios, lo que revela la importancia de detectar tempranamente las MBL para su control y evitar su diseminación en los centros hospitalarios.

El objetivo del presente estudio es caracterizar y determinar la frecuencia de los genes de MBL en P. aeruginosa recuperadas de pacientes hospitalizados en el HMC.

EL ESTUDIO

Se realizó un estudio transversal. Se analizaron 76 aislados de P. aeruginosa, tomando sólo el primer aislamiento por cada paciente que cumplieron con el criterio de sensibilidad disminuida (halos menores de 23 mm) a los carbapenémicos imipenen o meropenem y resistentes a ceftazidima, recuperados de muestras clínicas de secreción respiratoria (58 %), heridas (21 %), orina (16 %) y sangre (5 %) de los servicios de hospitalización del HMC, entre enero y septiembre del 2016.

La susceptibilidad antimicrobiana se determinó por el método de disco difusión, siguiendo las recomendaciones del Clinical and Laboratory Standars Institute (CLSI) ⁹9. CLSI. Performance standards for antimi- crobial susceptibility testing. 26th ed. CLSI supplement. M100. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2016.. Se incluyeron los discos de antibióticos conteniendo: amikacina 30µg (AMK), aztreonam 30µg (ATM), cefepime 30µg (FEP), ceftazidima 30µg (CAZ), ciprofloxacina 5µg (CIP), gentamicina 10µg (GEN), imipenem 10µg (IPM), meropenem 10µg (MEM) y piperacilina/tazobactam 100/10µg (TZP) (Bioanalyse(r)). La interpretación se realizó según los puntos de corte del CLSI ⁹9. CLSI. Performance standards for antimi- crobial susceptibility testing. 26th ed. CLSI supplement. M100. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2016..

Para la determinación fenotípica se empleó la prueba de sinergia de doble disco descrito por Arakawa et al. (10), que se basa en la propiedad de inhibición de las MBL por agentes quelantes de metales como el ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) ⁷7. Radice M, Marin M, Giovanakis M, Vay C, Almuzara M, Limansky A. et al. Criterios de ensayo, interpretación e informe de las pruebas de sensibilidad a los antibióticos en los bacilos gram negativos no fermentadores de impor- tancia clínica: recomendaciones de la subcomisión de antimicrobianos de la SADEBAC- AAM. Rev argent micro- biol.2011; 43:136-56.^,1010. Arakawa Y, Shibata N, Shibayama K, Kurokawa H, Yagi T, Fujiwara H, et al. Convenient Test for screening Metal- lo-ß-lactamase-producing gram-nega- tive bacteria by using thiol compounds. J Clin Microbiol. 2000; 38(1): 40-43.. Las placas se inocularon según las recomendaciones del CLSI ⁹9. CLSI. Performance standards for antimi- crobial susceptibility testing. 26th ed. CLSI supplement. M100. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; 2016. y los discos de EDTA(Bioanalyse(r)), IPM y MEM se colocaron a una distancia de 15 mm, de centro a centro, entre los discos con antibiótico y el inhibidor ²2. Nicolau CJ, Oliver A. Carbapenema- sas en especies del género Pseudomonas. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010; 28(Supl 1):19-28.^,1111. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Pseudomonas spp. Colocación estratégica de discos. Buenos Aires: IN- EI-ANLIS 2013. Disponible en: http://antimicrobianos.com.ar/ATB/wp-content/uploads/2013/01/PAE.pdf
http://antimicrobianos.com.ar/ATB/wp-con... . Las placas se incubaron por 18 h a 35°C. Luego se realizó la lectura y se interpretó como posible presencia de MBL cuando existía un agrandamiento o distorsión entre los halos de inhibición de los discos de IPM o MEM hacia el disco de EDTA ¹⁰10. Arakawa Y, Shibata N, Shibayama K, Kurokawa H, Yagi T, Fujiwara H, et al. Convenient Test for screening Metal- lo-ß-lactamase-producing gram-nega- tive bacteria by using thiol compounds. J Clin Microbiol. 2000; 38(1): 40-43.^,1111. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas. Pseudomonas spp. Colocación estratégica de discos. Buenos Aires: IN- EI-ANLIS 2013. Disponible en: http://antimicrobianos.com.ar/ATB/wp-content/uploads/2013/01/PAE.pdf
http://antimicrobianos.com.ar/ATB/wp-con... .

La detección genotípica de MBL se ejecutó en el Laboratorio de Epidemiología Molecular y Genética del Instituto de Medicina Tropical "Daniel A. Carrión" de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Se utilizó ADN total como molde. Se amplificaron los genes codificantes de las MBL blaIMP y blaVIM por el método de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) múltiple según Ellington et al.¹²12. Ellington M, Kistler J, Livermore D, Woodford N. Multiplex PCR for rapid detection of genes encoding acquired metallo-ß-lactamases. J Antimicrob Chemother. 2007;59(2):321-2. doi: 10.1093/jac/dkl481.
https://doi.org/10.1093/jac/dkl481... y el gen blaNDM por PCR simple según Pasteran et al. ¹³13. Pasteran F, Albornoz E, Faccone D, Gomez S, Valenzuela C, Morales M, et al. Emergence of NDM-1-produc- ing Klebsiella pneumoniae in Gua- temala. J Antimicrob Chemother. 2012; 67(7):1795-7. doi: 10.1093/jac/dks101.
https://doi.org/10.1093/jac/dks101... (Tabla 1).

Se reportan las frecuencias y porcentajes con sus respectivos intervalos de confianza al 95% (IC 95%). Se utilizaron los programas estadísticos SPSS versión 21 y Excel de Windows.

El protocolo del estudio fue aprobado por el Comité de Ética del HMC. Todos los procedimientos del presente estudio tratan de preservar la integridad y los derechos fundamentales de los pacientes sujetos a investigación, de acuerdo con los lineamientos de las buenas prácticas clínicas y de ética en investigación biomédica.

HALLAZGOS

De los 76 aislados de P. aeruginosa, 24 (31,6 %) (IC 95%: 26,2 % - 36,9 %) fueron productores de MBL según la prueba fenotípica, estos mostraron sinergia (Figura 1) con al menos uno de dos carbapenémicos (IPM, MEM). La detección genotípica confirmó que los 24 aislados portaban genes codificantes de MBL, de los cuales 23 (95,8 %, IC 95%: 91,7 % - 99,9 %) presentaron el gen blaIMP y uno (4,2 %, IC 95%: 0,1 % - 8,3 %) presentó el gen blaVIM. No se detectó el gen blaNDM (Figura 2).

El perfil de susceptibilidad antimicrobiana de los 24 aislados de P. aeruginosa portadores de genes de MBL se muestran en la Figura 3.

La frecuencia de aislados de P. aeruginosa MBL positivas según las unidades de procedencia fueron: 75,0 % (IC 95%: 70,0 % - 80,0 %) de medicina, 12,5 % (IC 95%: 8,7 % - 16,3%) de cuidados intensivos y 4,2 % (IC 95%: 1,9 % - 6,5 %) de cirugía, neumología y ortopedia-traumatología.

La frecuencia de aislados con P. aeruginosa MBL positivas según tipo de muestra fueron: 54,2 % (IC 95%: 48,4 % - 60,0 %) de secreción respiratoria, 29,2 % (IC 95%: 24,0 % - 34,4 %) de herida, 12,5 % (IC 95%: 8,7 % - 16,3 %) de orina y 4,2 % (IC 95%: 1,9 % - 6,5 %) de sangre.

DISCUSIÓN

De las 76 cepas seleccionadas se encontró que 24 (31,6 %) de aislamientos, fueron positivos para la detección fenotípica de carbapenemasas tipo MBL, las cuales se confirmaron molecularmente como portadoras de genes codificantes de MBL, siendo el gen blaIMP el más frecuente (95,8 %), seguido del gen blaVIM (4,2 %), no detectándose el gen blaNDM.

La frecuencia de genes MBL hallada supera el 21,7 % reportado en el Instituto Nacional de Salud del Niño ¹⁴14. Gonzales Escalante E. Detección y caracterización molecular de metalo-ß-lactamasas en aislamientos de Pseudo- monas aeruginosa recuperados en el Instituto Nacional de Salud del Niño Lima-Perú ENT#091;InternetENT#093;. Lima: Instituto Nacional de Salud del Niño; 2013. Di- sponible en: http://www.insn.gob.pe/ sites/default/files/investigaciones/de- sarrollo/informes/2018/Informe%20 Final%20TO-02-2011.pdf, de los cuales el 92 % fueron genes blaIMP y 8 % genes blaVIM. Además, supera el 18,8 % reportado por Ríos ¹⁵15. Ríos P. Frecuencia de los genes blaIMP, blaVIM y blaNDM productores de metalo-b-Lactamasas en aislamientos de Pseudomonas aeruginosa no sen- sibles a Carbapenems en Lima-Perú ENT#091;Tesis para optar licenciatura en Tecnología MédicaENT#093;. Lima: Univer- sidad Nacional Mayor de San Mar- cos. 2013. Disponible en: http:// cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/ handle/cybertesis/5425/Rios_sp.pd- f ?sequence=1&isAllowed=y
http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream... en hospitales de Lima, quien sólo detectó genes blaIMP, no encontrando blaVIM, ni blaNDM. Estos datos sugieren que en los hospitales de Lima circula con mayor frecuencia P. aeruginosa con genes blaIMP y con menor frecuencia genes blaVIM.

En Latinoamérica ¹⁶16. Saavedra S, Duarte C, Gonzales M, Realpe M. Caracterización de aislamientos de Pseudomonas aeruginosa productores de carbapenemasas de siete departamentos de Colombia. Biomédica. 2014; 34(Supl1):217-23. doi:10.7705/biomedica.v34i0.1685.
https://doi.org/10.7705/biomedica.v34i0.... ^,1717. Labarca JA, Salles MJ, Seas C, Guz- mán-Blanco M. Carbapenem resistance in Pseudomonas aeruginosa and Acine- tobacter baumannii in the nosocomi- al setting in Latin America. Crit Rev Microbiol. 2016;42(2):276-92. doi: 10.3109/1040841X.2014.940494.
https://doi.org/10.3109/1040841X.2014.94... , los reportes publicados entre el 2004 y el 2012 indican que los genes de MBL más detectados en P. aeruginosa varían según países, así, en Brasil fueron los genes blaSPM, seguido de blaIMP y blaVIM, en tanto que en Argentina fueron blaIMP seguido de blaVIM, en Chile y Colombia sólo blaVIM y en México blaVIM y blaIMP.

En un hospital de Guadalajara ¹⁸18. Hernandez E. Identificación de metalo- betalactamasas (MBL) en aislamientos clínicos de Pseudomonas aeruginosa resistentes a carbapenemes en el Hospi- tal Civil de Guadalajara, Jalisco. ENT#091;Tesis para obtener el título de licenciado en química clínicaENT#093;. Xalapa: Universi- dad Veracruzana. 2005. Disponible en: http://www.remeri.org.mx/tesis/ INDIXE-TESIS.jsp?id=oai:cdigital. uv.mx:123456789/35584
http://www.remeri.org.mx/tesis/INDIXE-TE... se aislaron P. aeruginosa MBL positivas en un 34 %, de las cuales el 85,7 % portaban genes blaIMP.

En Perú, existen pocos estudios sobre la frecuencia de los mecanismos de resistencia, a pesar que Hong et al. ¹⁹19. Hong DJ, Bae IK, Jang IH, Jeong SH, Kang HK, Lee K. Epidemiology and Characteristics of Metallo-ß-Lact- amase-Producing Pseudomonas aerugi- nosa.InfectChemother.2015;47(2):81- 97. doi: 10.3947/ic.2015.47.2.81.
https://doi.org/10.3947/ic.2015.47.2.81... y Labarca et al. ¹⁷17. Labarca JA, Salles MJ, Seas C, Guz- mán-Blanco M. Carbapenem resistance in Pseudomonas aeruginosa and Acine- tobacter baumannii in the nosocomi- al setting in Latin America. Crit Rev Microbiol. 2016;42(2):276-92. doi: 10.3109/1040841X.2014.940494.
https://doi.org/10.3109/1040841X.2014.94... señalan que, según los reportes de la Organización Panamericana de la Salud del 2010 el Perú muestra una tasa de resistencia al IPM y al MEM en P. aeruginosa de 66 % y 57 %, respectivamente, siendo esta, la más alta de Latinoamérica y una las mayores del mundo.

Según Hong et al. ¹⁹19. Hong DJ, Bae IK, Jang IH, Jeong SH, Kang HK, Lee K. Epidemiology and Characteristics of Metallo-ß-Lact- amase-Producing Pseudomonas aerugi- nosa.InfectChemother.2015;47(2):81- 97. doi: 10.3947/ic.2015.47.2.81.
https://doi.org/10.3947/ic.2015.47.2.81... , en la mayoría de países, las tasas de P. aeruginosa resistentes a carbapenémicos están en el rango de 10 % a 50 %, encontrando en Canadá y República Dominicana las tasas más bajas (menos de 10 %), en tanto que en Brasil, Perú, Costa Rica, Rusia, Grecia, Polonia, Irán y Arabia Saudita se encuentran las tasas más altas (mas de 50 %). En la India, se aisla con mayor frecuencia P. aeruginosa con genes blaVIM²⁰20. Arunagiri K, Sekar B, Sangeetha G, John J. Detection and characterization of metallo-ß-lactamases in Pseudomo- nas aeruginosa by phenotypic and mo- lecular methods from clinical samples in a tertiary care hospital. West Indian Med J. 2012;61(8):778-83.

En el HMC, la frecuencia de MBL en P. aeruginosa pudo haberse incrementado por una presion de selección debido al uso de carbapenémicos, descrito previamente como un factor principal para la aparición de bacterias con nuevos mecanismos de resistencia ¹⁸18. Hernandez E. Identificación de metalo- betalactamasas (MBL) en aislamientos clínicos de Pseudomonas aeruginosa resistentes a carbapenemes en el Hospi- tal Civil de Guadalajara, Jalisco. ENT#091;Tesis para obtener el título de licenciado en química clínicaENT#093;. Xalapa: Universi- dad Veracruzana. 2005. Disponible en: http://www.remeri.org.mx/tesis/ INDIXE-TESIS.jsp?id=oai:cdigital. uv.mx:123456789/35584
http://www.remeri.org.mx/tesis/INDIXE-TE... . De los 24 aislamientos de P. aeruginosa MBL positivas, la mayoría procedían de la unidad de medicina (75,0 %), a diferencia de lo hallado en el Instituto Nacional de Salud del Niño ¹⁴14. Gonzales Escalante E. Detección y caracterización molecular de metalo-ß-lactamasas en aislamientos de Pseudo- monas aeruginosa recuperados en el Instituto Nacional de Salud del Niño Lima-Perú ENT#091;InternetENT#093;. Lima: Instituto Nacional de Salud del Niño; 2013. Di- sponible en: http://www.insn.gob.pe/ sites/default/files/investigaciones/de- sarrollo/informes/2018/Informe%20 Final%20TO-02-2011.pdf, en un hospital de BuenosAires ⁶6. Cejas D, Almuzara M, Santella G, Tu- duri A, Palombarani S, Figueroa S, et al. Caracterización fenotípica y genotípica de la resistencia a imipenem en Pseudo- monas aeruginosa aisladas en un hospi- tal de Buenos Aires. Rev argent micro- biol. 2008; 40(4):238-45. y en un hospital de Zaragoza ⁴4. Estepa V. Caracterización de mecanis- mos de resistencia a carbapenémicos, integrones y tipificación molecular en cepas de Pseudomonas aeruginosa de diferentes orígenes. ENT#091;Tesis Doctor- alENT#093;. Logroña: Universidad de la Rioja; 2014., donde la mayor frecuencia fue reportada en salas de UCI con 46 %, 78 % y 68 %, respectivamente, y en un hospital de Logroño en España donde procedían principalmente del área de cirugía (18 %) ⁴4. Estepa V. Caracterización de mecanis- mos de resistencia a carbapenémicos, integrones y tipificación molecular en cepas de Pseudomonas aeruginosa de diferentes orígenes. ENT#091;Tesis Doctor- alENT#093;. Logroña: Universidad de la Rioja; 2014..

Nuestros resultados indican que el tipo de muestra con mayor frecuencia de P. aeruginosa MBL positiva fue de secreción respiratoria (54,2 %), seguida de herida (29,2 %), orina (12,5 %) y sangre (4,2 %), demostrando que, en la unidad de medicina, las afecciones más frecuentes son las respiratorias, debido probablemente, al uso prolongado de ventilación mecánica. Esto coincide con lo reportado por Hidalgo et al. ¹1. Hidalgo LF, Marroquín JE, Antigoni J, Samalvide F. Prevalencia de infec- ciones hospitalarias en un hospital pe- ruano de nivel IV, en el año 2008. Rev Med Hered. 2011; 22(2):76-81. doi: 10.20453/rmh.v22i2.1106.
https://doi.org/10.20453/rmh.v22i2.1106... , donde la infección intrahospitalaria más común fue neumonía, asociada principalmente a ventilación mecánica; asimismo, Ríos ¹⁵15. Ríos P. Frecuencia de los genes blaIMP, blaVIM y blaNDM productores de metalo-b-Lactamasas en aislamientos de Pseudomonas aeruginosa no sen- sibles a Carbapenems en Lima-Perú ENT#091;Tesis para optar licenciatura en Tecnología MédicaENT#093;. Lima: Univer- sidad Nacional Mayor de San Mar- cos. 2013. Disponible en: http:// cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/ handle/cybertesis/5425/Rios_sp.pd- f ?sequence=1&isAllowed=y
http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream... y Gonzáles Escalante ¹⁴14. Gonzales Escalante E. Detección y caracterización molecular de metalo-ß-lactamasas en aislamientos de Pseudo- monas aeruginosa recuperados en el Instituto Nacional de Salud del Niño Lima-Perú ENT#091;InternetENT#093;. Lima: Instituto Nacional de Salud del Niño; 2013. Di- sponible en: http://www.insn.gob.pe/ sites/default/files/investigaciones/de- sarrollo/informes/2018/Informe%20 Final%20TO-02-2011.pdf reportaron P. aeruginosa MBL positivas en muestras respiratorias. En general, la frecuencia de P. aeruginosa MBL positiva varía según el tipo de muestra y las distintas unidades hospitalarias ¹1. Hidalgo LF, Marroquín JE, Antigoni J, Samalvide F. Prevalencia de infec- ciones hospitalarias en un hospital pe- ruano de nivel IV, en el año 2008. Rev Med Hered. 2011; 22(2):76-81. doi: 10.20453/rmh.v22i2.1106.
https://doi.org/10.20453/rmh.v22i2.1106... ^,44. Estepa V. Caracterización de mecanis- mos de resistencia a carbapenémicos, integrones y tipificación molecular en cepas de Pseudomonas aeruginosa de diferentes orígenes. ENT#091;Tesis Doctor- alENT#093;. Logroña: Universidad de la Rioja; 2014.^,66. Cejas D, Almuzara M, Santella G, Tu- duri A, Palombarani S, Figueroa S, et al. Caracterización fenotípica y genotípica de la resistencia a imipenem en Pseudo- monas aeruginosa aisladas en un hospi- tal de Buenos Aires. Rev argent micro- biol. 2008; 40(4):238-45.^,1414. Gonzales Escalante E. Detección y caracterización molecular de metalo-ß-lactamasas en aislamientos de Pseudo- monas aeruginosa recuperados en el Instituto Nacional de Salud del Niño Lima-Perú ENT#091;InternetENT#093;. Lima: Instituto Nacional de Salud del Niño; 2013. Di- sponible en: http://www.insn.gob.pe/ sites/default/files/investigaciones/de- sarrollo/informes/2018/Informe%20 Final%20TO-02-2011.pdf^,1515. Ríos P. Frecuencia de los genes blaIMP, blaVIM y blaNDM productores de metalo-b-Lactamasas en aislamientos de Pseudomonas aeruginosa no sen- sibles a Carbapenems en Lima-Perú ENT#091;Tesis para optar licenciatura en Tecnología MédicaENT#093;. Lima: Univer- sidad Nacional Mayor de San Mar- cos. 2013. Disponible en: http:// cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/ handle/cybertesis/5425/Rios_sp.pd- f ?sequence=1&isAllowed=y
http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream... ^,2020. Arunagiri K, Sekar B, Sangeetha G, John J. Detection and characterization of metallo-ß-lactamases in Pseudomo- nas aeruginosa by phenotypic and mo- lecular methods from clinical samples in a tertiary care hospital. West Indian Med J. 2012;61(8):778-83.

Todos los aislados productores de MBL fueron MDR, por presentar resistencia a tres familias de antibióticos diferentes. Varios estudios señalan que P. aeruginosa MDR porta genes bla que codifican MBL, localizados en casettes génicos dentro de integrones, transposones o plásmidos, junto con genes que codifican resistencia a otras familias de antibióticos ²2. Nicolau CJ, Oliver A. Carbapenema- sas en especies del género Pseudomonas. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2010; 28(Supl 1):19-28.^,44. Estepa V. Caracterización de mecanis- mos de resistencia a carbapenémicos, integrones y tipificación molecular en cepas de Pseudomonas aeruginosa de diferentes orígenes. ENT#091;Tesis Doctor- alENT#093;. Logroña: Universidad de la Rioja; 2014.^,77. Radice M, Marin M, Giovanakis M, Vay C, Almuzara M, Limansky A. et al. Criterios de ensayo, interpretación e informe de las pruebas de sensibilidad a los antibióticos en los bacilos gram negativos no fermentadores de impor- tancia clínica: recomendaciones de la subcomisión de antimicrobianos de la SADEBAC- AAM. Rev argent micro- biol.2011; 43:136-56..

Como limitaciones de nuestro estudio podemos mencionar que no se analizaron otros mecanismos de resistencia frente a carbapenémicos como la alteración o pérdida de porina OprD, sobreexpresión de bombas de eflujo o hiperproducción de AmpC. Además, es necesario el secuenciamiento para conocer las variantes alélicas de estas enzimas y su codificación genética, que nos permita saber si existen otros genes de resistencia relacionados.

De los resultados obtenidos, se concluye la existencia de enzimas MBLtipo IMP en cepas de P. aeruginosa aisladas de pacientes hospitalizados en el HMC, siendo más frecuentes en la unidad de medicina y en las muestras de secreciones respiratorias. Además, la frecuencia reportada de MBL supera a otros estudios en hospitales de Lima. Este es el primer reporte de MBL en el HMC, que es relevante porque advierte el hallazgo del gen blaIMP, de fácil transferencia entre bacilos gramnegativos. Esperamos que los hallazgos del presente estudio permitirán mejorar los protocolos del programa de control de infecciones nosocomiales, así como fortalecer la vigilancia epidemiológica de bacterias multirresistentes y prevenir su diseminación

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Fechas de Publicación

Histórico