RESUMEN

En el presente estudio, se analizaron los mecanismos de resistencia a nitrofuranos en 18 muestras cár nicas con Salmonella enterica (15 de pollo, 2 de ternera y 1 de cerdo) de mercados de Lima (Perú). Determinaron los serotipos de los aislamientos y la sensibilidad a furazolidona y nitrofurantoina (con y sin el inhibidor de bombas de expulsión Phenyl-Arginine-β-Naphthylamide [PAβN]), las mutaciones en los genes snrA y cnr por PCR y la transferabilidad de la resistencia por conjugación. Se identificaron 15 muestras con S. infantis (13 muestras de pollo), 2 con S. enteritidis y 1 con S. anatum. Todos los aisla mientos, excepto S. anatum, fueron resistentes a ambos nitrofuranos (concentración mínima inhibidora [CMI] a furazolidona: 32-64 µg/mL, CMI a nitrofurantoina: 128-256 µg/mL), sin diferencias al adicio narse PAβN. Todos los aislamientos resistentes a nitrofuranos presentaron sustituciones en snrA y cnr (S. infantis: snrA STOP-151; cnr STOP-137; S. enteritidis: snrA STOP-180; cnr STOP-179). No se detectaron mecanismos transferibles de resistencia a nitrofuranos.

Palabras clave:
Resistencia a Antibióticos; Furazolidona; Salmonella

ABSTRACT

The mechanisms of resistance to nitrofurans from 18 meat samples with Salmonella enterica (chicken: 15; beef: 2; pork: 1) collected in Lima (Peru) were analyzed. The isolates were serotyped and the susceptibility levels to furazolidone and nitrofurantoin [with and without the efflux pump inhibitor Phenyl-Arginine- β-naphthylamide (PAβN)], the presence of mutations in the snrA and cnr genes and the transferability of resistance by conjugation were established. Fifteen samples with S. infantis (13 from chicken samples), 2 with S. enteritidis and 1 with S. anatum were identified. All isolates except the S. anatum were resistant to both nitrofurans showing MICs (minimum inhibitory concentration) of furazolidone and nitrofurantoin of 32-64 μg/mL and 128-256 μg/mL, respectively. The addition of PAßN had no effect on the MIC levels. All nitrofuran-resistant isolates showed amino acid codon alterations at both snrA and cnr (S. infantis: snrA STOP-151; cnr STOP-137; S. enteritidis: snrA STOP-180; cnr STOP-179). No transferable mecha nisms of nitrofuran resistance were detected.

Keywords:
Drug resistance; Furazolidone; Salmonella

INTRODUCCIÓN

Los nitrofuranos son un grupo de antimicrobianos de origen sintético activos frente a parásitos y bacterias Gram-negativas y Gram-positivas ¹1. Vass M, Hruska K, Franek M. Nitrofuran antibiotics: a review on the application, prohibition and residual analysis. Vet Med (Praha). 2008;53(9):469-500. doi: 10.17221/1979-VETMED.
https://doi.org/10.17221/1979-VETMED... . Estos compuestos han sido ampliamente utilizados tanto en medicina humana como veterinaria, así como en promotores de crecimiento de animales destinados al consumo humano ¹1. Vass M, Hruska K, Franek M. Nitrofuran antibiotics: a review on the application, prohibition and residual analysis. Vet Med (Praha). 2008;53(9):469-500. doi: 10.17221/1979-VETMED.
https://doi.org/10.17221/1979-VETMED... . Actualmente, su uso en veterinaria para ani males de consumo humano está prohibido en numerosos países debido al riesgo a que estos antimicrobianos o sus metabolitos permanezcan en el alimento ¹1. Vass M, Hruska K, Franek M. Nitrofuran antibiotics: a review on the application, prohibition and residual analysis. Vet Med (Praha). 2008;53(9):469-500. doi: 10.17221/1979-VETMED.
https://doi.org/10.17221/1979-VETMED... . Su uso veterinario está prohibido en Perú desde 2013 ²2. Carrasco Valiente JA. Prohíben importación y comercialización de diversos principios activos, así como el uso de los mismos en la fabricación de productos veterinarios o alimentos para animales destinados al consumo humano y establecen otras disposiciones. Resolución Directoral Nº 0072-2013-MINAGRI-SENASA-DIAIA [Internet]. Diario Oficial El Peruano; 2013 (citado el 10 de agosto de 2019): 503464-5. Disponible en: https://www.minagri.gob.pe/portal/download/pdf/marcolegal/normaslegales/resolucionesdirectorales/2013/setiembre/rd72-2013-minagri-senasa-diaia.pdf.
https://www.minagri.gob.pe/portal/downlo... .

En líneas generales, los niveles de resistencia a nitrofurano en Enterobacteriaceae causantes de diarrea, como por ejemplo Shi gella spp., son bajos ³3. Pons MJ, Gomes C, Martínez-Puchol S, Ruiz L, Mensa L, Vila J, et al. Antimicrobial resistance in Shigella spp. causing traveller's diarrhoea (1995-2010): a retrospective analysis. Travel Med Infect Dis. 2013;11(5):315-9. doi: 10.1016/j.tmaid.2013.06.010.
https://doi.org/10.1016/j.tmaid.2013.06.... , habiéndose reportado los mayores niveles de resistencia a estos antimicrobianos en Salmonella spp. ⁴4. Antunes P, Machado J, Peixe L. Illegal use of nitrofurans in food animals: contribution to human salmonellosis?. Clin Microbiol Infect. 2006;12(11):1047-9. doi: 10.1111/j.1469-0691.2006.01539.x
https://doi.org/10.1111/j.1469-0691.2006... ^,55. García V, Montero I, Bances M, Rodicio R, Rodicio MR. Incidence and genetic bases of nitrofurantoin resistance in clinical isolates of two successful multidrug-resistant clones of Salmonella enterica serovar Typhimurium: pandemic "DT 104" and pUO-StVR2. Microb Drug Resist. 2017;23(4):405-12. doi: 10.1089/mdr.2016.0227.
https://doi.org/10.1089/mdr.2016.0227... . En la actualidad, los mecanismos de acción de los nitrofuranos están poco estudiados, habiéndose descrito principalmente en mutantes obtenidos in vitro.

Se ha descrito que los nitrofuranos precisan ser activados por nitroreductasas para ejercer su acción; la reacción de reducción constaría de varios pasos secuenciales, considerando que algunos de los productos generados en estos pasos intermedios podrían poseer actividad antimicrobiana ⁶6. McCalla DR, Kaiser C, Green MHL. Genetics of nitrofurazone resistance in Escherichia coli. J Bacteriol. 1978;133(1):10-6.^,77. Peterson FJ, Mason RP, Hovsepian J, Holtzman JL. Oxygen-sensitive and -insensitive nitroreduction by Escherichia coli and rat hepatic microsomes. J Biol Chem. 1979;254:4009-14.. Las nitroreductasas implicadas en estos procesos de activación son NfsA y NfsB ⁶6. McCalla DR, Kaiser C, Green MHL. Genetics of nitrofurazone resistance in Escherichia coli. J Bacteriol. 1978;133(1):10-6.. Así, en Escherichia coli, la presencia de alteraciones capaces de reducir o eliminar la funcionalidad de estas enzimas se ha asociado con el desarrollo de resistencia a nitrofuranos, tanto en estudios con mutantes obtenidos in vitro como en estudios desarrollados con aislamientos clínicos ⁸8. Martínez-Puchol S, Gomes C, Pons MJ, Ruiz-Roldán L, Torrents de la Peña A, Ochoa TJ, et al. Development and analysis of furazolidone-resistant Escherichia coli mutants. APMIS. 2015;123(8):676-81. doi: 10.1111/apm.12401.
https://doi.org/10.1111/apm.12401...

9. Whiteway J, Koziarz P, Veall J, Sandhu N, Kumar P, Hoecher B, et al. Oxygen-insensitive nitroreductases: analysis of the roles of nfsA and nfsB in development of resistance to 5-nitrofuran derivatives in Escherichia coli. J Bacteriol. 1998;180(21):5529-39.^-1010. Shanmugam D, Esak SB, Narayanaswamy A. Molecular characterisation of nfsA gene in nitrofurantoin resistant uropathogens. J Clin Diagn Res. 2016;10(6):DC05-09. doi: 10.7860/JCDR/2016/17280.7957.
https://doi.org/10.7860/JCDR/2016/17280.... . También se ha descrito el rol de bombas de expulsión en la resistencia a nitrofuranos. Además, se ha constatado que la bomba de expulsión OqxAB, perteneciente a la familia RND (del inglés Resistance-Nodulation-Division), es capaz de conferir resistencia a nitrofurantoina ¹¹11. Ho PL, Ng KY, Lo WU, Law PY, Lai EL, Wang Y, et al. Plasmid-mediated OqxAB is an important mechanism for nitrofurantoin resistance in Escherichia coli. Antimicrob Agents Chemother. 2015;60(1):537-43. doi: 10.1128/AAC.02156-15.
https://doi.org/10.1128/AAC.02156-15... .

Pese a los antecitados mayores niveles de resistencia presentes en Salmonella spp., el número de estudios realizados enfocados al estudio de los mecanismos de resistencia a nitrofuranos es escaso ⁵5. García V, Montero I, Bances M, Rodicio R, Rodicio MR. Incidence and genetic bases of nitrofurantoin resistance in clinical isolates of two successful multidrug-resistant clones of Salmonella enterica serovar Typhimurium: pandemic "DT 104" and pUO-StVR2. Microb Drug Resist. 2017;23(4):405-12. doi: 10.1089/mdr.2016.0227.
https://doi.org/10.1089/mdr.2016.0227... ^,1212. Aviv G, Tsyba K, Steck N, Salmon-Divon M, Cornelius A, Rahav G, et al. A unique megaplasmid contributes to stress tolerance and pathogenicity of an emergent Salmonella enterica serovar Infantis strain. Environ Microbiol. 2014;16(4):977-94. doi: 10.1111/1462-2920.12351.
https://doi.org/10.1111/1462-2920.12351... . Por lo tanto, el objetivo del presente estudio fue determinar los niveles y mecanismos de resistencia a nitrofuranos en aislamientos de Salmonella enterica procedentes de muestras cárnicas adquiridas en mercados tradicionales de Lima.

EL ESTUDIO

Se utilizaron 18 muestras con Salmonella enterica aisladas en 2012 de un estudio previo, que tuvo como objetivo determinar la pre sencia de Enterobacteriaceae y los niveles de resistencia a antimicrobianos de E. coli en muestras cárnicas (cerdo, pollo o ternera), adquiridas en mercados tradicionales del norte (Comas, San Martín), centro (La Victoria, Cercado de Lima) y sur (Villa El Salvador) de Lima ¹³13. Ruiz-Roldán L, Martínez-Puchol S, Gomes C, Palma N, Riveros M, Ocampo K, et al. Presencia de Enterobacteriaceae y Escherichia coli multirresistente a antimicrobianos en carne adquirida en mercados tradicionales en Lima. Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2018;35(3):425-32. doi: 10.17843/rpmesp.2018.353.3737.
https://doi.org/10.17843/rpmesp.2018.353... . El estudio se realizó en el ISGlobal, Hospital Clinic - Universitat de Barcelona (España), Nutreco (España) y el Instituto de Medicina Tropical Alexander von Humboldt (Perú). En todos los casos los aislamientos fueron identificados previamente por métodos bioquímicos y confirmados mediante amplificación del gen invA¹³13. Ruiz-Roldán L, Martínez-Puchol S, Gomes C, Palma N, Riveros M, Ocampo K, et al. Presencia de Enterobacteriaceae y Escherichia coli multirresistente a antimicrobianos en carne adquirida en mercados tradicionales en Lima. Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2018;35(3):425-32. doi: 10.17843/rpmesp.2018.353.3737.
https://doi.org/10.17843/rpmesp.2018.353... . Los aislamientos de S. enterica se recuperaron de -80 ºC y de manera previa a su uso se reconfirmaron mediante la amplificación y secuenciación del gen 16S rRNA¹⁴14. Salazar de Vegas EZ, Nieves B, Araque M, Velasco E, Ruiz J, Vila J. Outbreak of infection with Acinetobacter strain RUH 1139 in an intensive care unit. Infect Control Hosp Epidemiol. 2006;27(4):397-403. doi: 10.1086/503177.
https://doi.org/10.1086/503177... .

Se determinó los serotipos de los aislamientos mediante microarrays (Check & Trace Salmonella kit, Check-Points B.V, Wageningen, Holanda) siguiendo las instrucciones del fabricante. Tras ello se procedió a determinar la sensibilidad a furazoli dona (100 µg) y nitrofurantoina (300 µg) mediante el método de difusión en disco (BD, San Agustín del Guadalix, España), así como los valores de concentración mínima inhibitoria (CMI) mediante el método de dilución en agar, siguiendo las directrices de la guía CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) y utilizando la cepa E. coli ATCC 25922 como control de calidad ¹⁵15. Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI). Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; twenty-eight informational supplement [Internet] CLSI document M100-S28. Wayne: CLSI; 2018 [citado el 11 de agosto de 2019]. Disponible en: https://clsi.org/media/2663/m100ed29_sample.pdf.. En la guía CLSI no existe un punto de corte específico para furazolidona, por lo que en este caso se reportan los datos de CMI y/o diámetro de halo.

Tanto para nitrofurantoina como para furazolidona, los valores de CMI se determinaron en presencia de Phenyl-Argi nine-ß-Naphthylamide (PAßN, por sus siglas en inglés), un inhibidor de bombas de expulsión de tipo RND ⁸8. Martínez-Puchol S, Gomes C, Pons MJ, Ruiz-Roldán L, Torrents de la Peña A, Ochoa TJ, et al. Development and analysis of furazolidone-resistant Escherichia coli mutants. APMIS. 2015;123(8):676-81. doi: 10.1111/apm.12401.
https://doi.org/10.1111/apm.12401... . Para su uso, el PAßN se disolvió en dimetil sulfoxido (DMSO), motivo por lo que determinó el efecto de este solvente en el crecimiento bacteriano.

En todos los aislamientos, se amplificaron los genes nfsA y nfsB mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) (ciclo inicial de 94 ºC por cinco minutos, seguido por 35 ciclos de 94 ºC por 40 segundos cada uno, 60 ºC por 30 segundos, 68 ºC por 40 segundos, y una extensión final de 72 ºC por cinco minutos). La PCR se realizó con los cebadores descritos por Salamanca-Pinzón et al. ¹⁶16. Salamanca-Pinzón SG, Camacho-Carranza R, Hernández-Ojeda SL, Frontana-Uribe BA, Espitia-Pinzón CI, Espinosa-Aguirre JJ. Correlation of the genotoxic activation and kinetic properties of Salmonella enterica serovar Typhimurium nitroreductases SnrA and cnr with the redox potentials of nitroaromatic compounds and quinones. Mutagenesis. 2010;25(3):249-55. doi: 10.1093/mutage/geq001.
https://doi.org/10.1093/mutage/geq001... , visualizándose en geles de agarosa al 2% teñidos con SYBR Safe (Invi trogen, Carlsbad, EE. UU.). Las bandas obtenidas fueron recuperadas del gel y se purificaron utilizando el kit Wizard SV Gel and PCR Clean Up System (Promega, Madison, EE. UU.). Los productos purificados fueron enviados a Macrogen (Seul, Corea del Sur) para su secuenciación.

Por último, la presencia de mecanismos transferibles de resistencia a nitrofuranos se determinó por conjugación siguien do el protocolo previamente descrito ¹⁷17. Pérez-Moreno MO, Pico-Plana E, de Toro M, Grande-Armas J, Quiles-Fortuny V, Pons MJ, et al. ß-Lactamases, transferable quinolone resistance determinants, and class 1 integron-mediated antimicrobial resistance in human clinical Salmonella enterica isolates of non-Typhimurium serotypes. Int J Med Microbiol. 2013;303(1):25-31. doi: 10.1016/j.ijmm.2012.11.003.
https://doi.org/10.1016/j.ijmm.2012.11.0... . Para este fin se utilizó como cepa receptora a E. coli J53 (resistente a azida sódica) y agar Mueller-Hinton suplementado con azida sódica (150 µg/ml) y furazolidona (16 µg/ml) como medio para seleccionar los transconjugantes.

HALLAZGOS

Los 18 aislamientos que se incluyeron en el presente estudio provenían de cuatro mercados diferentes de las tres áreas del estu dio original (cono norte, centro y sur) (Tabla 1), lo que demostró, por tanto, una amplía diseminación por toda el área de Lima.

Los resultados del serotipado mostraron que la mayoría de los aislamientos pertenecían al serotipo infantis (15 aislamien tos, 83,3%). Las tres cepas restantes se clasificaron como enteritidis (dos cepas, 11,1%) y anatum (una cepa, 5,6%). Los aisla mientos del serotipo infantis se recuperaron de los tres tipos de muestras cárnicas, en especial de las muestras de pollo. Así 13 de los 15 aislamientos recuperados procedían de muestras de pollo, mientras que se aisló una de S. infantis en muestras de ternera, y otra en muestras de cerdo. Por su parte, los dos aislamientos de S. enteritidis provinieron de muestras de pollo y el de S. anatum de ternera (Tabla 1).

Todos los aislamientos, a excepción de la cepa de S. anatum, presentaron niveles de CMI de 32-64 µg/ml para furazolidona, siendo resistentes a nitrofurantoina con CMIs de 128-256 µg/ml. El aislamiento de S. anatum presentó CMIs de 8 µg/ml para furazo lidona y de 32 µg/ml para nitrofurantoina (Tabla 2).

Asimismo, se observó correlación entre los valores de CMI y los halos observados en los estudios con discos de antibió tico. Así, en el caso de los aislamientos resistentes a nitrofurantoina se observaron halos de 8- 11 mm de diámetro para este antibiótico y de 8-13 mm para furazolidona, mientras que el aislamiento sensible presentó halos de 20 mm a nitrofurantoina y 24 mm a furazolidona.

La adición de PAßN no afectó los valores de CMI, que en todos los casos permanecieron inalterados, lo cual mostró la no implicación de bombas de expulsión tipo RND en el desarrollo de resistencia a nitrofuranos en los aislamientos estudiados. Ni PAßN ni DMSO interfirieron con el crecimiento normal de las bacterias.

Todos los aislamientos resistentes a nitrofuranos presentaron mutaciones en snrA y cnr. Los 15 aislamientos de S. infantis presentaron sendos codones STOP en la posición 151 de snrA y 137 de cnr, mientras que las dos S. enteritidis los presentaron en las posiciones 180 de snrA y 179 de cnr (Tabla 2). Por último, no se obtuvieron transconjugantes resistentes a nitrofuranos en los estudios de conjugación.

DISCUSIÓN

A pesar de que el uso de nitrofuranos en animales de consumo está prohibido en numerosos países, la resistencia a estos mismos se ha descrito en enteropatógenos, como es el caso de Salmonella spp., aisladas de muestras alimentarias ⁴4. Antunes P, Machado J, Peixe L. Illegal use of nitrofurans in food animals: contribution to human salmonellosis?. Clin Microbiol Infect. 2006;12(11):1047-9. doi: 10.1111/j.1469-0691.2006.01539.x
https://doi.org/10.1111/j.1469-0691.2006... ^,55. García V, Montero I, Bances M, Rodicio R, Rodicio MR. Incidence and genetic bases of nitrofurantoin resistance in clinical isolates of two successful multidrug-resistant clones of Salmonella enterica serovar Typhimurium: pandemic "DT 104" and pUO-StVR2. Microb Drug Resist. 2017;23(4):405-12. doi: 10.1089/mdr.2016.0227.
https://doi.org/10.1089/mdr.2016.0227... ; incluso, en algunos casos se han detectado restos de nitrofuranos en productos cárnicos ¹⁸18. McCracken RJ, Kennedy DG. Furazolidone in chicken: case study of an incident of widespread contamination. Br Poult Sci. 2013;54(6):704-12. doi: 10.1080/00071668.2013.850152.
https://doi.org/10.1080/00071668.2013.85... . Hay varias explicaciones posibles a estos hechos, las cuales incluyen la estabilidad de la resistencia a nitrofuranos, el uso de estos antimicrobianos, pese a tratarse de productos prohibidos, o la existencia de contaminación ambiental ⁴4. Antunes P, Machado J, Peixe L. Illegal use of nitrofurans in food animals: contribution to human salmonellosis?. Clin Microbiol Infect. 2006;12(11):1047-9. doi: 10.1111/j.1469-0691.2006.01539.x
https://doi.org/10.1111/j.1469-0691.2006... ^,88. Martínez-Puchol S, Gomes C, Pons MJ, Ruiz-Roldán L, Torrents de la Peña A, Ochoa TJ, et al. Development and analysis of furazolidone-resistant Escherichia coli mutants. APMIS. 2015;123(8):676-81. doi: 10.1111/apm.12401.
https://doi.org/10.1111/apm.12401... ^,1818. McCracken RJ, Kennedy DG. Furazolidone in chicken: case study of an incident of widespread contamination. Br Poult Sci. 2013;54(6):704-12. doi: 10.1080/00071668.2013.850152.
https://doi.org/10.1080/00071668.2013.85... .

El hecho que los enteropatógenos aislados tuviesen como origen muestras de los tres tipos de carnes (pollo, ternera y cer do), incluidos en el estudio y su presencia en las diferentes zonas de Lima, sugiere la amplia diseminación geográfica en el país de S. enterica resistentes a nitrofuranos. No obstante, se ha de considerar que las muestras procesadas se colectaron en 2012, un año antes de la prohibición en Perú del uso de nitrofuranos en la cría de animales de consumo ²2. Carrasco Valiente JA. Prohíben importación y comercialización de diversos principios activos, así como el uso de los mismos en la fabricación de productos veterinarios o alimentos para animales destinados al consumo humano y establecen otras disposiciones. Resolución Directoral Nº 0072-2013-MINAGRI-SENASA-DIAIA [Internet]. Diario Oficial El Peruano; 2013 (citado el 10 de agosto de 2019): 503464-5. Disponible en: https://www.minagri.gob.pe/portal/download/pdf/marcolegal/normaslegales/resolucionesdirectorales/2013/setiembre/rd72-2013-minagri-senasa-diaia.pdf.
https://www.minagri.gob.pe/portal/downlo... .

Se ha observado que la adquisición de resistencia a nitrofuranos es un hecho secuencial, en el que las nitrorreductasas NfsA y NfsB acumulan alteraciones que afectan su funcionalidad y que poseen un efecto aditivo en los niveles finales de resistencia a nitro furanos ⁹9. Whiteway J, Koziarz P, Veall J, Sandhu N, Kumar P, Hoecher B, et al. Oxygen-insensitive nitroreductases: analysis of the roles of nfsA and nfsB in development of resistance to 5-nitrofuran derivatives in Escherichia coli. J Bacteriol. 1998;180(21):5529-39.. Los resultados del presente estudio fueron concordantes, detectándose la presencia de mutaciones conducentes a la pre sencia de codones STOP en los genes equivalentes (snrA y cnr) y a la subsiguiente falta de nitroreductasas funcionales. Hasta la fecha muy pocos estudios han analizado los mecanismos de resistencia a nitrofuranos en S. enterica; en ellos se han encontrado escenarios similares, con presencia de codones STOP u otras alteraciones en los genes snrA o cnr⁵5. García V, Montero I, Bances M, Rodicio R, Rodicio MR. Incidence and genetic bases of nitrofurantoin resistance in clinical isolates of two successful multidrug-resistant clones of Salmonella enterica serovar Typhimurium: pandemic "DT 104" and pUO-StVR2. Microb Drug Resist. 2017;23(4):405-12. doi: 10.1089/mdr.2016.0227.
https://doi.org/10.1089/mdr.2016.0227... ^,1212. Aviv G, Tsyba K, Steck N, Salmon-Divon M, Cornelius A, Rahav G, et al. A unique megaplasmid contributes to stress tolerance and pathogenicity of an emergent Salmonella enterica serovar Infantis strain. Environ Microbiol. 2014;16(4):977-94. doi: 10.1111/1462-2920.12351.
https://doi.org/10.1111/1462-2920.12351... .

Si bien en el presente estudio no se obtuvieron transconjugantes resistentes a nitrofuranos, se han descrito mecanismos trans feribles de resistencia a nitrofuranos. Entre estos, merece una especial atención la bomba de expulsión OqxAB, la cual ha sido recientemente implicada en el desarrollo de resistencia a nitrofurantoina ¹¹11. Ho PL, Ng KY, Lo WU, Law PY, Lai EL, Wang Y, et al. Plasmid-mediated OqxAB is an important mechanism for nitrofurantoin resistance in Escherichia coli. Antimicrob Agents Chemother. 2015;60(1):537-43. doi: 10.1128/AAC.02156-15.
https://doi.org/10.1128/AAC.02156-15... . OqxAB es una bomba de expulsión de tipo RND, indígena de Klebsiella spp., la cual fue detectada y codificada por primera vez en plásmido en aislamientos de E. coli de origen veterinario en un estudio sobre la resistencia a olaquindox ¹⁹19. Ruiz J. Transferable Mechanisms of quinolone resistance from 1998 onward. Clin Microbiol Rev. 2019;32(4):e00007-19. doi: 10.1128/CMR.00007-19.
https://doi.org/10.1128/CMR.00007-19... . En Perú, el uso de olaquindox en animales de consumo se prohibió a la par que el de nitrofuranos ²2. Carrasco Valiente JA. Prohíben importación y comercialización de diversos principios activos, así como el uso de los mismos en la fabricación de productos veterinarios o alimentos para animales destinados al consumo humano y establecen otras disposiciones. Resolución Directoral Nº 0072-2013-MINAGRI-SENASA-DIAIA [Internet]. Diario Oficial El Peruano; 2013 (citado el 10 de agosto de 2019): 503464-5. Disponible en: https://www.minagri.gob.pe/portal/download/pdf/marcolegal/normaslegales/resolucionesdirectorales/2013/setiembre/rd72-2013-minagri-senasa-diaia.pdf.
https://www.minagri.gob.pe/portal/downlo... . En la actualidad, se conocen al menos 14 alelos de oqxA y 28 de oqxB codificados en plásmidos, sin que la actividad específica de cada uno de ellos haya sido establecida ¹⁹19. Ruiz J. Transferable Mechanisms of quinolone resistance from 1998 onward. Clin Microbiol Rev. 2019;32(4):e00007-19. doi: 10.1128/CMR.00007-19.
https://doi.org/10.1128/CMR.00007-19... .

La presencia de mutaciones en acrB, emrD, yajR o macB, genes codificantes de bombas de expulsión cromosomales, ha sido im plicada en el desarrollo de resistencia a nitrofuranos ²⁰20. Li XZ, Plésiat P, Nikaido H. The challenge of efflux-mediated antibiotic resistance in Gram-negative bacteria. Clin Microbiol Rev. 2015;28(2):337-418. doi: 10.1128/CMR.00117-14.
https://doi.org/10.1128/CMR.00117-14... . La más estudiada de estas bombas es AcrAB que, al igual que OqxAB, es una bomba de expulsión de tipo RND. La bomba AcrAB, al igual que otras bombas de tipo RND incluyendo a OqxAB, puede ser inhibida usando substancias como PAßN ¹⁹19. Ruiz J. Transferable Mechanisms of quinolone resistance from 1998 onward. Clin Microbiol Rev. 2019;32(4):e00007-19. doi: 10.1128/CMR.00007-19.
https://doi.org/10.1128/CMR.00007-19... ^,2020. Li XZ, Plésiat P, Nikaido H. The challenge of efflux-mediated antibiotic resistance in Gram-negative bacteria. Clin Microbiol Rev. 2015;28(2):337-418. doi: 10.1128/CMR.00117-14.
https://doi.org/10.1128/CMR.00117-14... . En el presente estudio no se observó efecto de PAßN, por lo que se descartó que la sobreexpresión de bombas tipo AcrAB estuviese implicada en el desarrollo de resistencia a nitrofuranos en estos aislamientos, aportando además una evidencia complementaria sobre la ausencia de bombas plasmídicas OqxAB. En un estudio previo en el que se desarrollaron mutantes de E. coli resistentes a furazolidona, tampoco se detectó implicancia de bombas de expulsión inhibibles por PAßN ⁸8. Martínez-Puchol S, Gomes C, Pons MJ, Ruiz-Roldán L, Torrents de la Peña A, Ochoa TJ, et al. Development and analysis of furazolidone-resistant Escherichia coli mutants. APMIS. 2015;123(8):676-81. doi: 10.1111/apm.12401.
https://doi.org/10.1111/apm.12401... .

Debido a la metodología utilizada la presencia de mecanismos de resistencia transferibles que solo confiriesen modestos incrementos en los niveles de resistencia, podría haber pasado desapercibida, lo que constituye una limitación del presente estudio. Asimismo, los aislamientos incluidos en el estudio son del 2012, lo que resalta la necesidad de efectuar nuevos estudios que permitan valorar la situación actual.

El presente estudio describe la presencia de niveles altos de resistencia a nitrofuranos en aislamientos de Salmonella en terica procedentes de muestras de alimentos cárnicos comercializados en el área de Lima. Estos niveles de resistencia se re lacionaron de manera directa con la presencia de mutaciones cromosomales en los genes snrA y cnr. Es preciso mantener un seguimiento de los niveles de resistencia a nitrofuranos en S. enterica.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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