Señor editor: En los últimos años se ha incrementado el uso de muestras de sangre seca en papel filtro (dried blood spots, DBS) para detectar anti cuerpos contra virus de la hepatitis C (VHC), virus dengue y VIH, entre otros.¹1. Smit PW, Elliott I, Peeling RW, Mabey D, Newton PN. An overview of the clinical use of filter paper in the diagnosis of tropical diseases. Am J Trop Med Hyg. 2014;90:195-210. https://doi. org/10.4269/ajtmh.13-0463
https://doi.org/10.4269/ajtmh.13-0463... ^,22. Ross RS, Stambouli O, Grüner N, Marcus U, Cai W, Zhang W, et al. Detection of infections with hepatitis B virus, hepatitis C virus, and hu man immunodeficiency virus by analyses of dried blood spots-performance characteristics of the ARCHITECT system and two commercial assays for nucleic acid amplification. Virol J. 2013;5:10:72 En el laboratorio de infec ciones de transmisión sexual del Instituto Nacional de Salud Pública hemos utilizado DBS para detectar anticuerpos contra virus del herpes simplex tipo 2 y VHC,³3. Gutierrez JP, Conde-González CJ, Walker DM, Bertozzi SM. Herpes simplex virus type 2 among Mexican high school adolescents: prevalence and association with community characteristics. Arch Med Res. 2007;38:774-82. https://doi. org/10.1016/j.arcmed.2007.04.002
https://doi.org/10.1016/j.arcmed.2007.04... ^,44. Gutiérrez JP, Sucilla-Pérez H, Conde-González CJ, Izazola JA, Romero-Martínez M, Hernández-Ávila M. Disminución de la seroprevalencia de hepatitis C en México: resultados de la Ensanut 2012. Salud Publica Mex. 2016;58:25-32. https:// doi.org/10.21149/spm.v58i1.7664 y recien temente implementamos el inmu noanálisis quimioluminiscente de micropartículas (CMIA) (VIH Ag/ Ab Combo de Abbott) en muestras DBS para detección antígeno/anti cuerpo de VIH.⁵5. Gutiérrez JP, Sucilla-Pérez H, Conde-González CJ, Izazola JA, Romero-Martínez M, Hernández-Ávila M. Seroprevalencia de VIH en población mexicana de entre 15 y 49 años: resultados de la Ensanut 2012. Salud Publica Mex . 2014;56:323-32. https://doi.org/10.21149/spm.v56i4.7352
https://doi.org/10.21149/spm.v56i4.7352... El ensayo considera positivas las muestras con un índice ≥1 y negativas las muestras <1, sin una zona gris o indeterminada, por lo que determinamos una zona gris para mejorar la sensibilidad y especificidad de la prueba con DBS. Primero estandarizamos un par de pruebas para la detección de VIH con DBS: un ensayo tipo Western Blot (New Lav Blot l, Bio-Rad VIH 1) y una prueba de aglutinación de partículas (Serodia VIH 1, Fujirebio Inc), utilizando un panel de muestra en paralelo, suero-DBS.

El ensayo de aglutinación mostró resultados claros tras una sola adaptación durante la preparación de la muestra eluida; en lugar de utilizar suero, se inició con un círculo de papel filtro o spot de 6 mm, que se eluyó en 300 μl de amortiguador de lavado (elución por 12h a 4°C en movimiento mecánico). Con respecto a la prueba de Western blot, se utilizaron 250 μl del eluido; posteriormente se diluyó con 2 000 μl de amortiguador de lavado, sufi ciente para observar las bandas cla ramente. Al utilizar dicha cantidad de eluido no se observaron bandas en las muestras negativas, lo que indica que no existe interferencia al utilizar una mayor concentración con DBS. Con ambos ensayos de DBS se observó 100% de concordancia con los resultados de suero, a partir de 15 muestras positivas y 15 negativas a VIH.

Se utilizó el método de agluti nación de partículas por su menor costo y mayor facilidad de ejecución para procesar muestras de DBS con resultado cercano al punto de corte para CMIA: 48 muestras con un índice de 0.5-0.99 y 53 muestras con índice de 1.0-2.99. Se confirmaron como positivas a VIH 12.5% de las muestras con índice de 0.5-0.99 y 62.3% en aquellas con un índice de 1.0-2.99. Se incrementó el porcentaje de pruebas confirmadas como posi tivas en función del índice, desde 5% en muestras con un índice de 0.5-0.74, hasta 100% en aquellas con un índice de 2.5-2.99 (p<0.001, χ² de tendencia), tal como se presenta en el cuadro I. Proponemos que, al utilizar el ensayo CMIA con muestras de DBS, se cree una zona gris a partir de muestras con un índice de 0.75 a 2.49, con lo cual se evitaría 12.5% de muestras falsas negativas y 43.5% de falsas positivas, lo que aumentaría la sensibilidad y la especificidad del ensayo, de forma similar a la mencionada en estudios previos.

La mayoría de las pruebas sero lógicas están validadas para su uso a partir de muestras de suero o plasma, lo que hace necesaria la validación de cada prueba comercial si se usan DBS. Determinamos las condiciones de elución y las modificaciones al protocolo de los estuches comercia les de las pruebas de Western blot y aglutinación de partículas para detección de anticuerpos contra VIH, así como la propuesta de una zona gris para utilizar en el ensayo CMIA con muestras de DBS.

Referencias

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